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Situato a valle rispetto all'omonima località e pochi chilometri a nord-ovest rispetto al lago di Chiusi, il Lago di Montepulciano è formato dal canale maestro della Chiana che risulta esserne sia l'immissario che l'emissario. La sponda sud-orientale del lago segna il confine tra la Toscana e l'Umbria mentre a 15 chilometri circa ad est del bacino lacustre, in territorio umbro, si trova il Lago Trasimeno.